** Facultad de Medicina
Instituto de Investigación en Medicina y Ciencias de la Salud

  Año 2014

  Proyecto:   Dinámica in vitro de biopelículas de la microbiota vaginal y de Listeria monocytogenes, Streptococcus agalactiae y Escherichia coli sobre la membrana amniótica.


Investigadores

Resumen

Farinati, Alicia Esther
Arcos, Marisa
Marques, Melina Daiana
Orsini, Adrián Oscar
Semeschenko, Daniyil
Souto, Agustina
Villanueva, Ruben

 La membrana amniótica (MA) es la capa profunda de la placenta, la  parte más interna del amnios que rodea al feto durante el embarazo. La MA comparte su origen celular con el feto y evoluciona con el en forma conjunta. Es el único tejido considerado para transplante en forma universal.  

Es una membrana delgada, transparente, plateada, que tapiza la cara interna del corion y de la placa corial de la placenta, y forma una vaina al cordón umbilical. Se debe al crecimiento de la vesícula amniótica, la cual se pone en contacto con el corion. 

Carece de una serie de estructuras como serían músculo liso, nervios y, sobre todo, vasos linfáticos y sanguíneos. Estas circunstancias pueden ser las que justifiquen su baja antigenicidad y la inexistencia de rechazo tras su implantación.

La estructura histológica del amnion varía desde la concepción hasta el momento del

parto. Derivado del ectodermo, se compone de cinco capas: epitelio, membrana basal y tres capas mesenquimatosas (capa esponjosa, capa de fibroblastos y capa compacta). El epitelio está firmemente adherido a la gr uesa membrana basal sub- yacente.  Es cuboideo y, observado al microscopio, presenta numerosas vacuolas. 

Este epitelio posee capacidad de secreción y reabsorción activas, en relación con la formación de líquido amniótico. La superficie apical de las células amnióticas posee muchos microvilli. En la base, los pr ocesos ciliares o pedículos se extienden dentro de la membrana basal a modo de podocitos. Los procesos de las células basales tienen una unión con la membrana basal tipo hemidesmosomas con tonofilamentos, y la sustancia de la membrana basal subyacente es parcialmente amorfa y parcialmente microfibrilar1.

Los cambios del colágeno durante la gestación y las diferencias observadas con PROM sugieren que puede ser determinada por factores que controlan la síntesis y la degradación del colágeno2, 3.  

Microscópicamente las células epiteliales presentan núcleos irregulares; de forma perinuclear se observan numerosas vacuolas que revelan la base de la función secretora de estas células. También encontramos, intracelularmente, un aparato de Golgi activo que confirma la existencia de un metabolismo celular activo 

Esta complicada ultraestructura epitelial sugiere que el amnios no es una simple membrana que contiene al líquido amniótico, sino que tiene múltiples funciones específicas a realizar y básicamente tres: 1-efecto mecánico epitelial de recubrimiento, 2-acción secretora activa de diferentes péptidos y 3-transporte intenso intracelular y transcelular. En el lado más externo de esta capa existe una hilera de células mesenquimáticas. La capa más externa es una zona esponjosa relativamente acelular que se continúa con la segunda membrana fetal, el corion. Por debajo del epitelio amniótico encontramos la membrana basal de gran grosor y resistencia Finalmente, la capa más inferior corresponde a la matriz del estroma, cuyo espesor puede variar ampliamente entre diferentes placentas, y que se divide en una capa compacta desprovista de células y formada por un tejido compacto, capa fibroblástica, formada por fibroblastos y células de Hofbauer, y capa esponjosa, formada por el retículo del

celoma extraembrionario y que está en contacto con el corion. La regulación del transporte hidroelectrolítico y su actividad metabólica hace que la MA contribuya a un intercambio con el medio que rodea al niño y también con el conducto cervical. 

Consideremos ahora a los microorganismos que constituyen la microbiota o microbioma vaginal. Hay estudios que demuestran la complejidad de la misma 4,5   y posiblemente represente una asociación mutualistica balanceada 6.  Hasta ahora desarrollamos el modelo experimental .Este nos permite asegurar que: 1-la MA no se rompe al ser estirada por el tubo del balón , 2-el sistema permanece estéril, 3-que es apto para estudiar la actividad de los microorganismos sobre la MA  o bien del material vaginal , pues se puede analizar el medio de cultivo o LA mediante la aguja adosada. 

We developed a model in which we are able to demonstrate the AM activity in sterile conditions. We put an AM obtained from cesarean section surgery over a glass support in which we are able to put culture media broth in one side and microbes, vaginal fluid or other clinical samples in the other one. Everything is done under sterile conditions and incubated under 36ºC. Until this moment we can say that:

1) the AM is resistant to our model and does not break up during the study. 

2) the system remains sterile during the whole study. 

3) we are able to study different samples such as vaginal flora or bacterial strains. 

We think that with this model we will be able to study the activity of microorganisms or vaginal fluid of healthy and non healthy women over the AM. It will also allow the study of the antimicrobial agents activity, its penetration and even the bacterial biofilm influence. It will be an excellent way to analyze and explain the relationship between the AM and women genital tract infections.

Este proyecto se está desarrollando y de inicio presentamos un trabajo sobre el diseño experimental en el  8th World Congress of Perinatal Medicine in Developing Countries  Cancun  Méjico (2014) y en las Jornas Intercátedras 2014 de la Facultad de Medicina (USAL) 

Se incluyen 3 trabajos

1.8th World Congress of Perinatal Medicine in Developing Countries. An experimental model to study the amniotic membrane (AM)

MM Semeshchenko, A Bracco, A Farinati 

We think that with this model we will be able to study the activity of microorganisms or vaginal fluid of healthy and non healthy women over the AM. It will also allow the study of the antimicrobial agents activity, its penetration and even the bacterial biofilm influence. It will be an excellent way to analyze and explain the relationship between the AM and women genital tract infections.

En el mismo congreso presentamos  el comportamiento de Streptococcus agalactiae frente a diferentes pH pues  este es uno de los microorganismos elegidos para comprobara la actividad sobre la membrana amniótica 

2.Behaviour of Streptococcus agalactiae (GBS) Biofilm (BF) from Urogenital Female Origin Against Different pHs as a Risk for Perinatal Infections.

Marqués M; Semeshchenko D; Quinteros M;  Farinati A 

3.Jornadas Intercátedras de la Facultad de Medicina de la Universidad del Salvador 

Diseño de un modelo experimental para el estudio de la actividad microbiana sobre la membrana amniótica

Cátedra de Microbiología y Parasitología- Cátedra Extracurricular de Biopelículas Facultad de Medicina - Universidad del Salvador.

Conclusiones: creemos que es una posibilidad cierta para el estudio no sólo de la actividad de los microorganismos o material vaginal ya que de esta manera podremos inferir la actividad de los microorganismos vaginales totales de mujeres sanas y con patologías endógenas del tracto genital inferior. Además   permitirá el ensayo de compuestos antimicrobianos sobre la penetración a través de la MA. 

Posteriormente se pueden efectuar estudios histológicos sobre la MA bajo la actividad de los microorganismos y la formación de biopelículas sobre la misma.

Bibliografía 

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Palabras claves: 

Membrana amniótica

biopelícula

Listeria monocytogenes

Streptococcus agalactaiae

Escherichia coli