2.1 Animales 

Ratas Wistar macho de entre 180-200 g de peso corporal, mantenidas y tratadas de acuerdo con las recomendaciones internacionales (CCAC).

Los animales fueron alojados en jaulas individuales de polipropileno con disponibilidad ad libitum de agua y alimento balanceado (Cargill, Bs.As.). Las jaulas fueron colocadas siempre en la misma habitación, con aire acondicionado a temperatura de 25 ± 20 ºC, con ciclo de luz-oscuridad de 12 horas.

2.2 Equipos - Software para PC

·         Equipo generador de PEMF, AC (ondas sinusoidales), continuos, de 50 Hz  y 7.2 mT-72 Gauss. (Magnetherp - Meditea Electrónica , Argentina)

·         Equipo Accutrend GC (Boehringer Mannheim).

·         Software para PC: Scion Image  for Windows versión Beta 4.0.2.

2.3 Drogas

·         Ketamina clorhidrato (Ketalar - Parke Davis)

·         Solución cicatrizante compuesta por clorhidrato de lincomicina 1g y zinc piridina-3-carboxilato 1.20g / 100ml (Nicozinc solución- Laboratorios Soubeiran Chobet)

·         Dodecilsulfato de sodio (Lauryl sulphate) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO., USA).

·         Proteinasa K (Lyophilized powder) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO., USA).  Carbazole (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO., USA).

·         Streptozotocin (Sigma Chemical Co., USA)

2.4 Métodos 

2.4.1   Cicatrización de heridas experimentales                             

Para la experiencia de cicatrización de heridas experimentales, se aplicó un método desarrollado en mi laboratorio (Patiño et al., 1996) para lo cual se anestesiaron los animales con clorhidrato de ketamina (30mg/kg i.m.), diez minutos antes de realizar cirugía y se los colocó en posición decúbito ventral, practicándoles una lesión circular de 3 cm de diámetro en el dorso.  Las lesiones se practicaron con la ayuda de un bisturí hasta la fascia superficial. El paniculus carnosus también fue escindido. 

Se efectuó la planimetría de las heridas los días 0, 7, 14 y 21 luego de los tratamientos post-día 0, para lo cual se tomó un molde de cada herida con papel de calcar.

Se determinó el área de la lesión en los distintos tiempos por medida de los moldes de papel, representativos del tamaño de la lesión, utilizando el programa Scion Image  for  Windows - Beta 4.0.2.

Para el estudio de los efectos de los PEMF sobre la cicatrización de heridas se utilizaron dos grupos de animales:

a.    Animales sanos

b.    Animales diabéticos. (Los resultados se reportarán en el póximo informe de avance 2015)

En este grupo la diabetes fue inducida por una inyección única intraperitoneal de STZ (70 mg/kg) en buffer citrato 0.1M, pH 4. A las 72hs de la administración se extrae sangre del seno venoso orbital oftálmico mediante capilares heparinizados y se determina la glucemia por el método de la glucosa oxidasa mediante tiras reactivas y reflectómetro Accutrend GC. Animales con niveles de glucosa superiores a 200  mg% fueron usados para el estudio.

2.4.1.1 Diseño experimental

Luego de haberse practicado las heridas experimentales en los animales normales y diabéticos, fueron divididos en tres grupos:

• Grupo control (SHAM) (n=8). Fueron  colocados separadamente en el interior de la bobina de exposición pero no recibieron ningún tipo de emisión.
• Otro grupo fue tratado diariamente en forma tópica con la solución cicatrizante de lincomicina y zinc piridina (n=8).
• Grupo PEMF (n=8) que recibió dos aplicaciones diarias de PEMF (50 Hz - 7.2 mT) de 30 min de duración cada una.

En los días 0, 7, 14 y 21 se efectuó la planimetría de las heridas con determinación del área de la lesión utilizando (programa Scion Image  for Windows) y paralelamente las determinaciones de la glucemia, con muestras de sangre provenientes por punción del seno venoso orbitario oftálmico con capilares heparinizados.

 2.5 Análisis estadístico

Se calcularon las medias ± ESM de las áreas de las heridas de los grupos de ratas controles y diabéticas con los respectivos porcentajes de cicatrización en los distintos tiempos. Se calcularon también las medias ± ESM del contenido de GAGs en el tejido de granulación, de los grupos de animales normales y diabéticos en los cuales se practicaron heridas experimentales.

Los resultados fueron evaluados estadísticamente mediante el análisis de varianza (ANOVA) seguido del test de Tukey-Cramer de comparaciones múltiples (p<0.05).

1.    CICATRIZACION DE HERIDAS EXPERIMENTALES

2.1 Area de las heridas en ratas normales. Efecto de PEMF.

Para el grupo de ratas sin ninguna patología, pueden observarse las medias ± SEM de la medida de las áreas (cm²)  de las heridas en los distintos tiempos a partir del día 0, que fue el día en que se practicaron, y a los 7, 14 y 21 días, como así también los porcentajes de cicatrización de las mismas para los distintos tratamientos.

El grupo expuesto a los PEMF muestra valores de áreas significativamente menores a partir del día 7 de tratamiento (P < 0.05) y en los días 14 y 21 (P < 0.01) con relación al grupo control con porcentajes de cicatrización del 23, 69 y 81% respectivamente.

Para el grupo tratado con el agente cicatrizante (Nicozinc), las medidas de las áreas fueron significativamente menores en los días 14 y 21 de tratamiento (P < 0.05) con respecto al grupo control, con porcentajes de cicatrización muy inferiores a los del grupo expuesto a los PEMF, del 31 y 34 %.

Los valores de las áreas para el grupo PEMF son significativamente menores a lo largo de toda la experiencia, comparados con los correspondientes al grupo tratado con Nicozinc (P < 0.05  a P < 0.01).

Por otra parte no se observaron diferencias significativas en los pesos de los animales durante la realización de la experiencia.