Los Baculovirus (Bv) infectan varios tipos de células de mamíferos a pesar de que son incapaces de replicar e integrar su genoma en los cromosomas de mamíferos. Se ha informado de que los Bv tienen propiedades adyuvantes.

Los baculovirus pertenecen a una amplia familia de virus que infectan a artrópodos que no son patógenos para los mamíferos. Estudios recientes han demostrado propiedades adyuvantes de baculovirus mediante la mejora y la modulación de la respuesta inmune en ratones. Esta capacidad ha sido explicada en parte por la activación de la inmunidad innata. En concreto, los baculovirus (Bvs) interactúan con el toll-like receptor-9 (TLR-9) intracelular de los macrófagos y las células dendríticas a través de motivos CpG presente en sus genomas, e induce la producción de IL-12, IL-6, TNF -α y de tipo I IFNs. Aunque la capacidad adyuvante de baculovirus está mediada principalmente por el IFN-alfa / beta, los mecanismos independientes de los IFN de tipo I de señalización están también involucrados.

Por otra parte, importantes niveles de producción de IFN-α son detectables en ratones deficientes en MyD88 cuando las células son estimuladas in vitro con Bvs, lo que sugiere que los componentes virales distintos de Bv-ADN o TLR9 / vías de reconocimiento Bv-ADN-MyD88 independiente, también participan en las propiedades inmunoestimulantes de BVs. Todos estos hallazgos, sin embargo, sólo se han demostrado en ratones y el uso de proteínas modelo como antígenos. A fin de analizar las posibles funciones de la inmunidad innata en la protección contra el VFA, este proyecto propone la generación de BVs recombinantes que llevan motivos CpG estimulantes descritos para los bovinos que también pueden permitir su uso en el ganado, y para estudiar las propiedades adyuvantes de BVs recombinantes en el bovino.

-Dado los resultados prometedores obtenidos en en el modelo murino (informado en avances 2013), se decidió estudiar la inmunidad a corto plazo inducida por el Bv contra VFA en el bovino, uno de los hospedadores naturales del Virus. Por otro lado, se conoce que los motivos CpGs han sido descriptos (como se mencionó)  también como adyuvantes, se decidió entonces potenciar la acción adyuvante del Bv, para ello se trabajó con Bv a los que se les incorporaron motivos CpG que fueron descriptos según bibliografía como apropiados para bovinos.

Construccion of Baculovirus recombinante (rBV) llevando 7 motivos CpG adicionales descriptos como potenciales adyuvantes para bovinos

Objetivos específicos

* Diseño y construcción de Baculovirus recombinante por inclusión de motivos CpGs (descriptos como adyuvantes para bovinos)

* Evaluacion de la respuesta inmune y la protección inducida en ratones (ya informado) y en bovinos por vacunas basadas en Virus VFA inactivado y el Baculovirus recombinante

Actividades

* Se construyó un Bv que lleva 7 motivos adicionales CpG descriptos como potenciales adyuvantes en bovinos        

Producción de Bv recombinante que lleva secuencias CpG

•           Producción a escalado medio de Bv CpG:

-Se realizaron 2 pasajes seriados a MOI 0.01

- Se infectaron las células Sf9 de insecto en un fermentados Bioflo110.

- Se realizó la concentracion de 5L de suspensión viral por Filtración FlowTangential.

- Se obtuvo un stock de Bv con título: 5x10⁹ pfu/ml para cada bovino del experimento

Estudios de la acción del Bv en bovinos, Impacto del BV CpG en la inmunidad innata

-Dos bovinos fueron inoculados por vía intravenosa con Baculovirus (5x10⁹ pfu) y otro bovino con medio de cultivo solo (control negativo)

-A las 6 y 24 hs post infección con Bv se evaluó por ELISA el IFNen suero, también  se aislaron  células mononucleares a partir de sangre periférica y se midieron las células productoras de IFN  medidas por ELISPOT.

-No se detectó ninguna diferencia entre los animales tratados y no tratados con el Bv (ver esquema de trabajo).

Evaluación de la protección frente al desafío con el VFA

Los 3 bovinos fueron desafiados a las 6 y 24 hs post inoculación de Bv (5x10⁹ pfu) con 10⁴ SMLD50 de VFA O1 Campos.

Los animales fueron chequeados diariamente por una semana, observando las lesiones típicas de VFA

Ninguna diferencia se detectó entre los animales tratados y no tratados con Baculovirus en cuanto a severidad ni cantidad de lesiones

CONCLUSIONES

La inyección del Bv a la dosis estudiada (5x10⁹ pfu) y en los tiempos evaluados (6 y 24 hs post inyección), no induce en bovinos un estado antiviral.