Investigadores
Resumen
Barrandeguy, María Edith
Zabal, Osvaldo Alfredo
Duffy, Sergio Jorge
Miño, Orlando Samuel
Olguin Perglione, Cecilia
Fernández, Fernando M.
Objetivo 1: Caracterización molecular de las cepas de influenza equina detectadas durante los brotes ocurridos en Uruguay y Argentina en el año 2012. Se obtuvo la secuencia de aminoácidos de la subunidad HA1 (hemoaglutinina viral) y se las comparó con secuencias de referencia del clado 1 del sublinaje Florida (A/eq/SouthAfrica/4/2003 y A/eq/Ohio/1/2003). Las cepas virales detectadas en Uruguay y Argentina en el año 2012 tienen una identidad del 98%, poseen 5 sustituciones de aminoácidos (G7D; R62K; D104N; A138S y V223I) con respecto a las cepas de referencia. Adicionalmente, se identificó una sexta sustitución de aminoácidos (M70V) en las cepas detectadas en el hipódromo de San Isidro, en un haras en San Antonio de Areco, en un establecimiento de cría de caballos mestizos en Esquel y en algunas del hipódromo de La Plata. Una de las sustituciones de aminoácidos (R62K) ocurrió en el sitio antigénico E de la HA. Para cumplimentar el primer objetivo del presente proyecto, se realizó la caracterización molecular y análisis filogenético retrospectivo de las cepas de influenza equina detectadas en la Argentina entre los años 1993 y 2005 (De archivo). Se realizó la amplificación por OneStep RT-PCR y secuenciación del gen de la hemaglutinina, (HA1) completa (1009pb) de 22 cepas virales de archivo (detectadas entre el año 1993 y 2005). A partir de las secuencias nucleotídicas obtenidas, se realizó la caracterización y el análisis filogenético, utilizando el Método de Neighbor-Joining (Distancias). El análisis de las secuencias de nucleótidos obtenidas demostró que todos los virus detectados en la Argentina en este periodo son del subtipo H3N8. El análisis filogenético realizado utilizando las secuencias de nucleótidos obtenidas y las de referencia disponibles en el GenBank, demostró que estos virus se encuentran dentro del linaje Americano y agrupan en 3 clados diferentes. Las cepas detectadas durante los años 1993-1996 (n = 5), forman un grupo monofilético, denominado Sudamericano Clado 1. Las cepas detectadas con posterioridad en el país, durante el período 1997-2005 (n = 9), forman un clado separado de las anteriores, denominado Sudamericano Clado 2. Dentro de este mismo clado, se agrupa una cepa detectada en Chile en el año 2006. Los virus detectados en el país en el año 2012 (n = 8), agrupan dentro del Florida Clado 1. Estas cepas, las circulantes en 2012, no están relacionados con los virus detectados con anterioridad en el país (1993 a 2005) y son similares a los detectados en los últimos diez años en Estados Unidos, Japón, Australia y Europa. De los resultados obtenidos en este proyecto se concluye que los virus que ocasionaron el brote en el año 2012 fueron introducidos al país, probablemente por el movimiento internacional de caballos. No se ha detectado infección por el virus de Influenza equina con posterioridad al brote del año 2012, la vigilancia epidemiológica pasiva realizada en hisopados nasofaríngeos provenientes de animales en cuarentena pre-exportación (103, 230 y 234 en el año 2012, 2013 y 2014 respectivamente) que fueron analizados por Real Time RT-PCR (amplifica el gen que codifica para la proteína M del Virus de Influenza A) dieron resultado negativo. Objetivo 2: Se tomaron muestras de suero de equinos SPC en entrenamiento, de entre 3 y 14 años de edad, alojados en los Hipódromos de Palermo y San Isidro. Se realizaron 2 muestreos anuales de acuerdo a un diseño estadístico aleatorio simple. El cálculo del tamaño de muestra se realizó con el programa WinEpi, Universidad de Zaragoza © 2006, estimándose una prevalencia "a priori" de un 70%, un nivel de confianza del 95% y un error absoluto máximo aceptable del 5%. La evaluación del nivel de anticuerpos se realizó mediante la técnica de Inhibición de la Hemoaglutinación (IHA) frente a la cepa A/eq/Argentina/E-2345-1/12. Los animales con títulos de anticuerpos ≥1:64 fueron considerados protegidos, entre 1:16 y 1:32 parcialmente protegidos y ≤ 1:8 o negativo, susceptibles. En las tablas 1 y 2 que se adjuntan se muestran los resultados obtenidos. En el Hipódromo de Palermo, el porcentaje de animales con niveles de anticuerpos intermedios y altos, equinos parcialmente protegidos y protegidos respectivamente, fue disminuyendo desde un 97% en septiembre de 2012 a un 71% en junio de 2014, aumentando lógicamente la proporción de animales susceptibles desde un 3 a un 29% en el mismo período. Un cuadro similar, menos marcado, pudo observarse en los animales del Hipódromo de San Isidro, 89 % en septiembre de 2012 a 76 % en julio de 2014, aumentando el número de animales susceptibles, que pasó de 11% en septiembre de 2012 a 24% en julio de 2014. Estos resultados permiten concluir que el estado inmunitario de la población de ambos hipódromos era óptimo en septiembre de 2012, 3 meses después de haberse producido un brote de Influenza equina y que con el correr del tiempo (aproximadamente 2 años), la proporción de animales susceptibles se fue incrementando, lo que podría deberse a irregularidades en los programas de vacunación, incorporación de animales jóvenes pobremente inmunizados, etc. Estos datos podrían ser de utilidad para que las autoridades sanitarias de los hipódromos puedan tomar medidas, como revacunar a los animales, con el fin de minimizar el riesgo de padecer un brote epizoótico de Influenza equina Alumnos practicantes 2014 (4to año) Federico Cotti Francisco Navarro Mia Brutomesso Clara Lombardi Martín Brutti Carla Moriggia Rayen Gaggero Ma. Constanza Rodríguez Paula Rey Melcón Carla Palma ANEXO 1: PRODUCCIÓN CIENTÍFICA Nombre del Proyecto: CARACTERIZACION GENETICA DE VIRUS DE INFLUENZA EQUINA CIRCULANTES EN LA REGION YESTIMACIÓN DE LOS NIVELES DE PROTECCIÓN EN CABALLOS EN ENTRENAMIENTO Y COMPETENCIA Período Informado: enero 2013 julio 2014 1- Trabajos publicados en revistas periódicas, libros o capítulos de libros -Impacto de las infecciones virales en la reproducción equina Vissani, M.A.; Olguin Perglione, C.; Barrandeguy, M. (2013). En Resúmenes de conferencias del III Congreso Argentino de Reproducción equina. Ed: Luis Losinno. UniRío editora ISBN 978-987-6888-028-2 pp: 57-68 -Novel vaccination approaches against Equine Alphavirus Encephalitides Carossino, M.; Thiry, E.; De la Grandière, A.; and Barrandeguy, M.E. Vaccine (2013),http://dx.doi.org/10.1016/j.vaccine.2013.11.071 -Relevamiento serológico de anticuerpos contra enfermedades virales de interés sanitario en llamas (Lama glama) de la provincia de Jujuy, Argentina Elena S. Barbieria, Daniela V. Rodríguez, Raúl E. Marin, Walter Setti, Sandra Romero, María Barrandeguya, y Viviana Parreño. Rev Argent Microbiol. 2014;46(1):53-57 -Actualización sobre encefalitis equinas del Este, Oeste y Venezuela, enfermedades olvidadas para tener en cuenta. M. Carossino, M. Barrandeguy. La especie equina Num 43 Junio 2013 -Estimación de los niveles de protección contra Influenza equina en caballos en entrenamiento y competencia. Carossino, M.1,2; Olguín Perglione, C.1; Miguens Soubie, A.3; Vissani, A.1; Becerra, L.1; Duffy, S. J.4; Campodónico, R.5;Arcuri, C.5; Costa, A.6;Zambruno, T.6; Elgue, F.6; Gómez, M.S.6; Zabal, O.1,2; Barrandeguy, M.E1,2 La especie equina Num 46 Marzo 2014 2- Trabajos en prensa del último año Vissani, MA., Thiry, E., Dal Pozzo, F., Barrandeguy, M. Antiviral agents against equid alphaherpesviruses: current status and perspectives. Enviado a The Veterinary Journal el 23 de abril de 2013./ Submitted to The Veterinary Journal on April 23th, 2013 (YTVJL-D-13-00331R1). Agustín Góngora; María Barrandeguy; Karl A. Ciuderis Aponte.Monitoreo serológico de arteritis viral equina en Municipios de la Orinoquia, Colombia/Serological survey for Equine Viral Arteritis in several municipalities in the Orinoquia region, Colombia. Revista MVZ Córdoba, órgano de difusión de la Facultad de medicina Veterinaria y Zootecnia; Universidad de Córdoba, Montería, Colombia Moré, G.; Vissani, A. ; Pardini, L.; Monina, M.; Muriel, M. 5; Howe, D. 6; Barrandeguy, M. 3; Venturini M.C. 1 JEVS-D-13-00253, titled "Seroprevalence of Sarcocystis neurona and its association with neurological disorders in Argentinean horses," has been accepted for publication in the Journal of Equine Veterinary Science. 3- Trabajos enviados para su publicación en el último año Irene Alvarez , Fabiana Cipolini, Andrés Wigdorovitz , Karina Trono, Maria E. Barrandeguy. The usefulness of ELISA commercial kits for the screening of Equine Infectious Anemia infection Revista Argentina de Microbiología Se adjunta nota de recepción de la revista. 4- Trabajos en preparación para su publicación Ø Complete genome sequence of Equid herpesvirus 3 Steven Sijmons, Aldana Vissani, Maria Silva Tordoya, Benoît Muylkens, Etienne Thiry, Piet Maes, Marc Van Ranst, Maria Barrandeguy, Jelle Matthijnssens ABSTRACT Equid herpesvirus 3 (EHV-3) is a member of the subfamily Alphaherpesvirinae that causes equine coital exanthema. While the genomes of other equine alphaherpesviruses (EHV-1, EHV-4, EHV-8 and EHV-9) have been published previously, sequence information for EHV-3 is limited. Here, we report the first complete genome sequence of EHV-3. Its 151,601 nt genome is predicted to encode 76 distinct genes like the other equine alphaherpesviruses, but genetic comparison demonstrated that it is the most divergent equine alphaherpesvirus, possessing nucleotide identities ranging from 62.1% to 64.9% with EHV-1, EHV-4, EHV-8 and EHV-9. Ø Epidemiological and virological findings during multiple outbreaks of equine influenza in South America in 2012. Cecilia Olguin Perglionea, Agustina Rimondia, Samuel Miñoa, Aldana Vissania, Mariano Carossinoa, Sarah Gildeab, Ann Cullinaneb, Maria Barrandeguyac aInstituto de Virología, CICVyA, INTA, Hurlingham, Buenos Aires, Argentina. bVirology Unit, The Irish Equine Centre, Johnstown, Naas, Co. Kildare, Ireland. cCátedra de Enfermedades Infecciosas, Escuela de Veterinaria, Universidad del Salvador. Correspondence: Maria Barrandeguy, Instituto de Virología, CICVyA, INTA, CC 25 (1712), Castelar, Buenos Aires, Argentina. E-mail:barrandeguy.maria@inta.gob.ar Ø Comparison of two commercial kits and an in-house ELISA for the detection of equine Rotavirus in foal feces Miño S.; Kern, A.; Barrandeguy, M; Parreño V. Abstract Group A rotaviruses (RVA) are important infectious agents associated with diarrhea in the young of several animal species including foals. Currently, a variety of diagnosis methods are commercially available, like ELISA, latex agglutination and immunochromatographic assays. The aim of this study was to compare the sensitivity and specificity of two commercial diagnostic kits, Pathfinder™ Rotavirus and FASTest Rota® strip, with an in-house KERI ELISA for detection of equine RVA. A total of 172 stool samples from Thoroughbred foals with diarrhea were analyzed. Fifty samples were found positives and 122 negatives and were handling as reference population for the assay validation. Pathfinder™ Rotavirus showed 32% of sensitivity and 97% of specificity, FASTest Rota® strip 92% of sensitivity and 97% of specificity and KERI ELISA 76% of sensitivity and 93% of specificity. Pathfinder™ Rotavirus showed 77%, FASTest Rota® strip 95% and KERI ELISA 88%of accuracy to correctly classify the samples as equine RVA positive or negative. In conclusion, FASTest Rota® Strip is more suitable than ELISAPathfinder™ Rotavirus for the screening of Rotavirus infection in foals. The KERI ELISA showed an acceptable performance and could be considered a proper economic alternative for equine RVA diagnosis. Ø First Isolation of Bunyamwera Virus from horses of Santa Fe province, Argentina
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Palabras claves:
Equinos
Caracterización
Anticuerpos
Iinfluenza
Hemoaglutinina