** Facultad de Medicina
Instituto de Investigación en Medicina y Ciencias de la Salud

  Año 2013

  Proyecto:  Actividad de antibióticos y antiinflamatorios sobre el comportamiento de biopelículas de aislamientos bacterianos provenientes de infecciones oculares, en lentes de contacto y capas de células conjuntivales.


Investigadores

Resumen

Farinati, Alicia Esther
Arcos, Marisa
Diluca, Teresa
Santalucía, Martín

Accion in vitro de diferentes antiinflamatorios no esteroideos  (AINES) sobre  biopeliculas mixtas de SA y PA
Pseudomonas aeruginosa (PA) y Staphylococcus aureus (SA) son las bacterias más frecuentemente aisladas en infecciones oftalmológicas asociadas al uso de lentes de contacto, siendo causantes de infecciones que, con una mala evolución pueden llevar a la ceguera. La remoción natural de estas bacterias es inefectiva cuando la córnea está cubierta por la lente de contacto.Han demostrado en otros estudios que el Ketorolac disminuye la formación de biopelícula de Staphylococcus epidermindis causante de endoftalmitis.Objetivo: Investigar el efecto in vitro de diferentes AINES (Ketorolac y Bronfenac) sobre BP mixtas de PA y SA.Materiales y Métodos: Se utilizaron 10 aislamientos clínicos de PA y 1 de SA.Las biopelículas se estudiaron cualitativamente sobre dos soportes, dispositivos de vidrio y lentes de contacto sin uso. Cada inóculo (103cel/ml) fue incubado a 35°C en Tripticasa Soya Caldo, tanto en los dispositivos de vidrio como en las lentes de contacto. A cada sistema de biopelículas previamente descrito se le agrego  luego de 1 hr y 4 hr Ketroloc (50 microlitros) y Bronfenac (50 microlitros) para estudiar su efecto sobre la adhesión y dispersión.Las lentes de contacto fueron observadas con microscopia óptica (400x). Los dispositivos de vidrio fueron observados con microscopia óptica y de fluorescencia, teñidas con cristal violeta y naranja de acridina respectivamente. Se procedió de igual manera con la policubeta de 96 pocillos planos para la evaluación cuantitativa y fueron leídos con espectofotómetro (RT 2100C absorbance mode: 450 nm), teñidos con  cristal violeta.  Resultados: Adhesión: no pudimos diferenciar evidencia alguna de la actividad del Ketorolac en ninguno de los soportes. Dispersión: Se observó por espectrofotometría una reducción del color del 70%. Esto se correlaciona con la curva cualitativa de ambos sistemas de biofilm. Conclusiones: Notamos que el Ketorolac y el Bronfenac aumentaron la dispersión en todos los soportes. Estos resultados son importantes, considerando su uso en la prevención de infecciones asociadas a lentes de contacto. Presentado en el Congreso Argentino de Microbiologia, Buenos Aires, Septiembre de 2012Se presentaron avances (junio de 2013) sobre: Pseudomonas aeruginosa Biofilm (BF) Adhesion and Dispersion on lenses under Ketorolac (KL) Influence: in vitro study. Marisa Arcos; A. Farinati; M. Santanlucia; T. Di LucaPseudomonas aeruginosa (PA) is one the most important bacteria in eye infections like keratitis, scarring and even blindness when build up BF on lenses (CL). The natural bacterial remotion is ineffective when the eye is covered by a CL. It is demonstrated that KL reduces the formation of Staphylococcus epidermidis BF that caused endophthalmitis. Objective: to investigate in vitro effect of KL on PA BF. Material and methods: we use 13 PA clinical isolates. The BF was studied quantitatively on two supports: glass coupon (GC) and on new CL . Each isolate (inoculum 103 cel/ml), was incubated at 35ºC in Trypticase Soy Broth with the GC and CL (BF system-BFS). Adhesion and dispersion: after 1 and 4 hours we added KL (0.18 ug/ml) to each BFS. The CL were observed with optical microscopy (400x) without any tinction. The GC were observed with optical and fluorescence microscopy, stained whit crystal violet (CV) and acridine orange respectively. In a similar way we proceeded with a 96-well microtiter for quantitative evaluation and were observed with a microplate reader (RT 2100C absorbance mode: 450 nm) stained with CV. Results. Adhesion: we didn´ t find any evidence of KL activity in any of the supports. Dispersion: In microtiter plate absorbance reader reduction in 70% of color was observed. It was correlated with the qualitative assay on both BFS. Conclusions: we noticed that KL increased dispersion in all the supports. These results are important for considering their use in the prevention of CL associated infections.

Accion in vitro de diferentes antiinflamatorios no esteroideos  (AINES) sobre  biopeliculas mixtas de SA y PA

Pseudomonas aeruginosa (PA) y Staphylococcus aureus (SA) son las bacterias más frecuentemente aisladas en infecciones oftalmológicas asociadas al uso de lentes de contacto, siendo causantes de infecciones que, con una mala evolución pueden llevar a la ceguera. La remoción natural de estas bacterias es inefectiva cuando la córnea está cubierta por la lente de contacto.

Han demostrado en otros estudios que el Ketorolac disminuye la formación de biopelícula de Staphylococcus epidermindis causante de endoftalmitis.

Objetivo: Investigar el efecto in vitro de diferentes AINES (Ketorolac y Bronfenac) sobre BP mixtas de PA y SA.

Materiales y Métodos: Se utilizaron 10 aislamientos clínicos de PA y 1 de SA.

Las biopelículas se estudiaron cualitativamente sobre dos soportes, dispositivos de vidrio y lentes de contacto sin uso. Cada inóculo (103cel/ml) fue incubado a 35°C en Tripticasa Soya Caldo, tanto en los dispositivos de vidrio como en las lentes de contacto. A cada sistema de biopelículas previamente descrito se le agrego  luego de 1 hr y 4 hr Ketroloc (50 microlitros) y Bronfenac (50 microlitros) para estudiar su efecto sobre la adhesión y dispersión.

Las lentes de contacto fueron observadas con microscopia óptica (400x). Los dispositivos de vidrio fueron observados con microscopia óptica y de fluorescencia, teñidas con cristal violeta y naranja de acridina respectivamente. Se procedió de igual manera con la policubeta de 96 pocillos planos para la evaluación cuantitativa y fueron leídos con espectofotómetro (RT 2100C absorbance mode: 450 nm), teñidos con  cristal violeta. 

Resultados: Adhesión: no pudimos diferenciar evidencia alguna de la actividad del Ketorolac en ninguno de los soportes. Dispersión: Se observó por espectrofotometría una reducción del color del 70%. Esto se correlaciona con la curva cualitativa de ambos sistemas de biofilm.

Conclusiones: Notamos que el Ketorolac y el Bronfenac aumentaron la dispersión en todos los soportes. Estos resultados son importantes, considerando su uso en la prevención de infecciones asociadas a lentes de contacto. Hay que tener en cuernta que estas infecciones oculares pueden provocar lesiones severas y hasta la ceguera. Por ese motivo y teniendo en cuenta que los antimicrobianos no siempre logran concentraciones adecuadas en las biopeliculas que se forman sobre los lentes de contacto , al igual que sobre otros dispositivos que se introduce en el organismo ya sea para diagnòstico y/o terapéutica , es conveniente disponer de medicación accesoria que pueda influir en la formación, y dispersión de las biopeliculas 

Accion in vitro de diferentes antiinflamatorios no esteroideos  (AINES) sobre  biopeliculas mixtas de SA y PA

Pseudomonas aeruginosa (PA) y Staphylococcus aureus (SA) son las bacterias más frecuentemente aisladas en infecciones oftalmológicas asociadas al uso de lentes de contacto, siendo causantes de infecciones que, con una mala evolución pueden llevar a la ceguera. La remoción natural de estas bacterias es inefectiva cuando la córnea está cubierta por la lente de contacto.

Han demostrado en otros estudios que el Ketorolac disminuye la formación de biopelícula de Staphylococcus epidermindis causante de endoftalmitis.

Objetivo: Investigar el efecto in vitro de diferentes AINES (Ketorolac y Bronfenac) sobre BP mixtas de PA y SA.

Materiales y Métodos: Se utilizaron 10 aislamientos clínicos de PA y 1 de SA.

Las biopelículas se estudiaron cualitativamente sobre dos soportes, dispositivos de vidrio y lentes de contacto sin uso. Cada inóculo (103cel/ml) fue incubado a 35°C en Tripticasa Soya Caldo, tanto en los dispositivos de vidrio como en las lentes de contacto. A cada sistema de biopelículas previamente descrito se le agrego  luego de 1 hr y 4 hr Ketroloc (50 microlitros) y Bronfenac (50 microlitros) para estudiar su efecto sobre la adhesión y dispersión.

Las lentes de contacto fueron observadas con microscopia óptica (400x). Los dispositivos de vidrio fueron observados con microscopia óptica y de fluorescencia, teñidas con cristal violeta y naranja de acridina respectivamente. Se procedió de igual manera con la policubeta de 96 pocillos planos para la evaluación cuantitativa y fueron leídos con espectofotómetro (RT 2100C absorbance mode: 450 nm), teñidos con  cristal violeta. 

Resultados: Adhesión: no pudimos diferenciar evidencia alguna de la actividad del Ketorolac en ninguno de los soportes. Dispersión: Se observó por espectrofotometría una reducción del color del 70%. Esto se correlaciona con la curva cualitativa de ambos sistemas de biofilm.

Conclusiones: Notamos que el Ketorolac y el Bronfenac aumentaron la dispersión en todos los soportes. Estos resultados son importantes, considerando su uso en la prevención de infecciones asociadas a lentes de contacto. Hay que tener en cuernta que estas infecciones oculares pueden provocar lesiones severas y hasta la ceguera. Por ese motivo y teniendo en cuenta que los antimicrobianos no siempre logran concentraciones adecuadas en las biopeliculas que se forman sobre los lentes de contacto , al igual que sobre otros dispositivos que se introduce en el organismo ya sea para diagnòstico y/o terapéutica , es conveniente disponer de medicación accesoria que pueda influir en la formación, y dispersión de las biopeliculas 

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Palabras claves: 

biopelículas

lentes de contacto

células conjuntivales

levofloxacina

ketorolac