La leptospirosis es una enfermedad infecto-contagiosa, causada por una bacteria del género Leptospira que afecta sobre todo a los domésticos, los que sirven como fuente de infección para el hombre. Presenta una epidemiología compleja y distribución cosmopolita, en la que varias especies, actuan  como huéspedes de mantenimiento de muchas serovariedades en todo el mundo, siendo el hombre y los animales de explotación huéspedes accidentales .

Es la zoonosis de mayor distribución mundial. Algunas prácticas laborales, como el trabajo en  trabajos en agricultura y ganadería (veterinarios, ganaderos, trabajadores de mataderos), así como ciertas actividades recreativas que implican contacto con aguas posiblemente contaminadas, suponen los riesgos de contagio más importantes. La leptospirosis es un serio problema en las explotaciones ganaderas por las pérdidas que ocasiona, y por las implicancias en la salud pública .

Las prevalencias y tasas de incidencias publicadas para esta enfermedad en el mundo varían notablemente según la zona y pueden llegar a alcanzar valores elevados en tiempos de inundaciones. La República Argentina es un país endémico con brotes epidémicos en períodos lluviosos.

La OMS ha estimado una tasa de incidencia en humanos entre 4-100 casos por 100 000 habitantes en estos países. En la ganadería su importancia radica en las pérdidas que produce en la reproducción donde pueden aparecer natimortos, abortos y/o nacimientos de animales débiles e infertilidad. Resulta difícil estimar las pérdidas por este concepto, en gran parte por las dificultades inherentes al diagnóstico de la enfermedad.

El 5 a 10 % de los abortos en bovinos son debidos a leptospirosis. Podemos estimar que la pérdida por aborto está entre 500 y 1000 U$S. La mayoría de los abortos se presentan en el último tercio de la gestación y alrededor de las 6-12 semanas posteriores a la leptospiremia inicial. Con la entrada de la infección en un rodeo sin experiencia inmunitaria previa, podría esperarse hasta un 30 % de abortos, mientras que en un rodeo donde la infección ha estado ya presente los abortos pueden afectar al 5 % a 10 % de las vacas. Debemos tener en cuenta también el riesgo que representan los animales de compañía, los caninos son una fuente muy importante de diseminación de leptospiras.

Nuestro objetivo fue realizar un estudio epidemiológico de leptospirosis mediantes técnicas diagnósticas serológicas, bacteriológicas y genotipificación.

Resultados

-Determinamos las serovariedades circulantes en animales de producción y animales de compañía-Probamos técnicas de screening desarrolladas como procedimiento rápido, específico y efectivo para detectar animales positivos- Aislamos leptospiras a prtir de órganos de casos clínicas -Determinamos el perfil genético de las cepas circulantes mediante la técnica molecular de Multiple locus variable tándem repeats Realizamos estudios serológicos específicos para detectar anticuerpos contra leptospirosis y brucelosis.

1-MAT, Microaglutinación para Leptospira: Analizamos serológicamente a 700 animales incluídos en este estudio y tomamos conocimiento de las serovariedades circulantes.

Bovinos : 648 sueros Seroractivos a :Leptospira interrogans Pomona Pomona, Leptospira interrogans Hardjo Hardloprajitno,Leptospira interrogans Ballum Castellonis, Leptospira interrogans Wolfii 3705

Caninos: 52 sueros caninos Seroreactivos a :Leptospira interrogans Canicola,Leptospira borgpetersenii Ballum Castellonis, Leptospira interrogans Icterohaemorrhagiae   

Técnica: Microaglutinación ( MAT) gold standart. Resultados parciales: 35 % de seropositividad en bovinos y 15 % en caninos

2-Aislamiento:  Se procesaron 88 órganos, hígado, riñón y bazo de bovinos y 34 orinas de caninos. Aislamos leptospiras de los animales de producción. Se aislaron cepas de bovinos tipificadas como Leptospira interrogans Pomona Pomona.

Orina: Con la muestra de orina, se observó al microscopio para tratar de detectar leptospiras, sembramos asépticamente (pasaje por filtros de 0.22 µm) en el primero de la serie de cuatro tubos de medio de cultivo, 1ml de orina. A continuación realizamos diluciones 1/10 en los tubos siguientes. El objetivo fue eliminar por dilución, el efecto inhibidor sobre el crecimiento que tiene la orina.

Órganos : Se tomaron trozos de órgano y se quemó la superficie con una espátula metálica caliente. Se sacó un trocito del mismo con pipeta Pasteur o aguja de biopsia. Esta muestra de órgano luego fue sembrada asépticamente en un tubo con medio de cultivo .Se cortaron trocitos de los órganos (hígado, riñón, bazo) se los flameó y se los introdujo asépticamente en una jeringa de 10ml estéril. Luego se forzó el paso de este material a través del pico de la jeringa hacia un tubo con medio de cultivo y se lo dejó reposar de 30 a 60 minutos En todos los casos, los tubos con medio de cultivo sembrados fueron incubados a 28ºC y revisados semanalmente al microscopio de campo oscuro para observar el desarrollo de leptospiras. Se eliminaron los cultivos negativos a los seis meses.

3. Se puso a punto la técnica Múltiple-Locus Variable- number tandem repeat Análisis (MLVA) para tipificación molecular de las cepas aisladas, se puso a punto la técnica molecular MLVA se con partidores que flanquean a los loci de VNTR4, VNTR7, VNTR9, VNTR10, VNTR19, VNTR23 y VNTR31. Teniendo en cuenta el número de repeticiones de pares de bases obtenidas en cada cepa tipificada con la metodología propuesta, se podrá conocer los genotipos circulantes.

Para las próximas etapas pensamos realizar la caracterización molecular de cepas patógenas procedentes de casos clínicos.Se procesarán las cepas obtenidas y se estudiarán con la técnica molecular Multiple Locus Variable Analysis(MLVA). El procedimiento de determinación de tipos de cepas mediante MLVA se realizará con partidores que flanquean a los loci de VNTR4, VNTR7, VNTR9, VNTR10, VNTR19, VNTR23 y VNTR31.

Se analizará el patrón de bandas y se calcularán las copias y se utlizará el programa UPGM.

Se realizarán estudios serológicos de brucelosis.

Trabajos presentados:

 -Sylvia Grune Loffler, Luis Samartino, Carmelo Auteri, Graciela Romero, Bibiana Brihuega. 2013. Canicola genotypes isolated from diverse species in Argentina.  8 th Meeting International Leptospirosis Society. 8-11 october 2013,Fukuoka, japón.