Investigadores

Resumen

Fernández Suárez, Adriana Silvina
Longhi, Alberto
Mora, Noemí Gladys
Achi, María Verónica

La presencia de residuos de antibióticos en productos alimenticios representa un peligro potencial para los consumidores, debido a la aparición de reacciones alérgicas, desarrollo de resistencias bacterianas y modificaciones en la flora intestinal. En particular las tetraciclinas son antibióticos de amplio espectro ampliamente usados en medicina humana por lo cual, no es deseable el consumo de alimentos de origen animal que contengan cantidades que representen un riesgo.En el ámbito de la sanidad apícola, las tetraciclinas son usadas para combatir el loque, enfermedad bacteriana de las colmenas. Otras fuentes de residuos de estos antibióticos son los huevos y las leches ya que las carnes nunca han presentado residuos detectables. La miel y la leche son alimentos especialmente consumidos por los niños. Si bien hay métodos capaces de cuantificar residuos en leche y huevos, no son lo suficientemente sensibles para la detección de residuos en miel, matriz que presenta dificultades analíticas particulares para las tetraciclinas. El presente proyecto tiene como objetivo adaptar un método multiresidual para el análisis de tetraciclinas en miel (oxitetraciclina, tetraciclina, clortetraciclina y doxiciclina)  mediante HPLC-DAD que permita la cuantificación en miel a los niveles más bajos posibles. Posteriormente se analizarán los residuos remanentes en un número considerable de mieles, leche y huevos obtenidos de bocas de expendio. Con estos resultados se evaluará el riesgo para el consumo por los niveles de tetraciclinas que pueden provenir de las tres fuentes alimentarias de acuerdo a los nuevos lineamientos establecidos por FAO-OMS.

La presencia de residuos de antibióticos en productos alimenticios representa un peligro potencial para los consumidores. Las tetraciclinas son antibióticos de amplio espectro de amplio uso en medicina humana por lo cual no es deseable el consumo de alimentos de origen animal que contengan residuos de tetraciclinas que puedan contribuir a la aparición de resistencia bacteriana, alergias y/o alteraciones de la flora intestinal.

A estas razones se puede agregar el hecho de que son varios los alimentos de origen animal que pueden contribuir al aporte de residuos de tetraciclinas en la dieta alimentaria: carnes de distintas especies, leches, huevos y miel. Un análisis de riesgo sobre el consumo de residuos de estas drogas debe incluir todas estas fuentes. En el ámbito de la sanidad apícola, las tetraciclinas son utilizadas como tratamientos terapéuticos frente a la loque americana y es un alimento especialmente consumido por niños y enfermos.  Además la Argentina ha tenido problemas en el comercio con la Union Europea por la presencia de residuos de antibioticos

Los primeros objetivos de este proyecto fueron adaptar un método multiresidual para el análisis de tetraciclinas en miel (oxitetraciclina, tetraciclina, clortetraciclina y doxiciclina)  mediante cromatografía líquida de alta resolución con detección de arreglo de diodos (HPLC-DAD) que permita la cuantificación en miel a los niveles más bajos posibles y validarlo con estudios de linealidad, sensibilidad, repetibilidad, reproducibilidad y exactitud. Los métodos disponibles en leche y huevos solo llegan a 20 ppb y no se pueden utilizar en miel dada las fuertes interferencias que presenta la miel para el análisis cromatografico de residuos.

Para la extracción de las tertraciclinas de la miel se procedió de la siguiente manera: a 5 g de miel se le agregó el antibiótico democlociclina como standard interno y 40 ml de succinato de sodio 0.01 M, agitacion en vortex y posterior pasaje por columna conteniendo resina (Chelating Sepharode FastFlow) previamente acondicionada con 2x3 ml de agua, 2 ml de sulfato de cobre 0.02 M y 2x2 ml de agua. La columna se lavó con 3 ml de agua, 3ml metanol y 3 ml de agua y la muestra fue eluida con 12ml de cloruro de sodio en buffer McIlvaine y posteriormente pasada por una columna de 60 mg de C18 previamente acondicionada con 1ml de metanol y 1 ml de agua. La segunda columna fue lavada con ClH 0.1N en agua y la muestra eluida con 1ml ClH en metanol y evaporada hasta 0.5 ml de volumen.

Este proceso de extracción permitió obtener cromatogramas libres de interferencias para detectar los picos de las tetraciclinas a limites de detección compatibles con el análisis de residuos en miel. 50 ul del ultimo extracto fueron inyectados en un equipo HPLC con detector de arreglo de diodos (DAD) operado bajo las siguientes condiciones: Columna C18 (5 um) de 150x4.6 mm, flujo 1.5 ml/min, temperatura 35 C, Detector DAD a 356 nm, en gradiente fase mobil A:acetonitrilo y fase mobil B: acido oxálico 0.01M PH 2,7. Las tetraciclinas fueron eluidas antes de los 10 minutos.

Los coeficientes de correlacion de las curvas de calibración estuvieron cercanos a la unidad ( 0.994-0.997) en los rangos de análisis (4-90 ppb).La recuperación de las tetraciclinas fue en todos los casos superior al 70 %. La precisión y exactitud fueron evaluadas mediante determinaciones hechas en miel suplementada a 3 diferentes concentraciones de tetraciclinas y los resultados no diferían en mas del 10% del verdadero valor. Los límites de detección y cuantificación estaban por debajo de 4 ppb ( la Unión Europea señala que los limites de cuantificación deben ser al menos de 10 ppb).

El objetivo siguiente de este proyecto era el análisis de muestras de miel provenientes de bocas de expendio. Hasta el presente se analizaron 264 muestras de las cuales 245 (92%)fueron negativas y 19 ( 8%) fueron positivas. De estas ultimas 13 presentaron valores inferiores a 10 ppb, 2 valores entre 10-20 ppb, 3 valores entre 20 y 31 ppb y sólo una presentó residuos del orden de 85 ppb.

Los resultados individuales de las 19 muestras positivas fueron 8 ppb, 9 ppb, 8 ppb, 85 ppb, 6 ppb, 6 ppb, 8 ppb, 13 ppb, 11 ppb, 5 ppb, 31 ppb, 29 ppb, 7 ppb, 28 ppb, 7 ppb, 8 ppb, 5 ppb, 7 ppb y 5 ppb

En el próximo período se seguirán analizando muestras de miel así como de leche y huevos. Con estos resultados se evaluará el riesgo para el consumo por los niveles de tetraciclinas que pueden provenir de las tres fuentes alimentarias  de acuerdo a los nuevos lineamientos establecidos por FAO-OMS en el Joint FAO/WHO Expert Meeting on Dietary Exposure Assessment Methodologies for Residues of Veterinary Drugs que tuvo lugar en Roma en 2011 (7-11 noviembre). Como resultado del trabajo de los expertos se establecieron nuevos datos de consumo de los diferentes alimentos de origen animal que se sugieren para los análisis de riesgo en base a la información  proporcionada por los distintos países. 

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Palabras claves: 

Salud pública

Antibióticos

Inocuidad de alimentos

Residuos

tetraciclinas