Investigadores
Resumen
Zabal, Osvaldo Alfredo
La República Argentina es un importante productor a nivel mundial de miel y subproductos destinándose más del 90% de su producción al mercado externo. El principal problema que acarrean los productores, no solo de nuestro país sino también del mundo entero, es el relacionado con las enfermedades. Éstas, provocan innumerables pérdidas que van desde una disminución de la producción hasta la muerte de las colonias. En los últimos años se ha estimado que como consecuencia de las enfermedades millones de colmenas mueren anualmente. Entre los agentes patógenos, los virus juegan un rol fundamental en la producción de enfermedades. Un claro ejemplo es el "Síndrome del Colapso de las Colmenas" que ha llegado a afectar al 90% de colmenares de EEUU. Si bien la distribución de los principales virus que afectan a las abejas es mundial y a nivel de Sudamérica se ha reportado su presencia en Brasil y Uruguay, en nuestro país no se conoce nada respecto a la prevalencia de estos virus Resultados Implementación de las técnicas de RT- PCR para las principales virosis: Se puso a punto la técnica de RT-PCR, utilizando técnicas ya probadas (reactivos y procedimientos) probados y publicados en trabajos científicos, con especial atención a trabajos regionales (Brasil y Uruguay). De acuerdo a ello se prepararan reactivos y procedimientos para Virus de alas deformadas (DWV) Virus de la cría ensacada (SBV) Virus de Kashmir (KBV) Virus de la parálisis aguda de lãs abejas (ABPV) Virus de la parálisis israelí de las abejas (IAPV). Resultado de los 23 apiarios estudiados Nº % DWV 8 35 SBV 2 9 BQCV 5 22 ABPV 5 22 CBPV 1 4 IPBV 1 4 *N: número de apiarios positivos **Porcentaje de apiarios positivos Obtención de cultivos de células de larvas de abejas: -.Se realizaron 3 cultivos de larvas de diferentes estadios de desarrollo ( larvas en primeros estadios de desarrollo , larvas de desarrollo medio, larvas de ultimo estadio de crecimiento) Las larvas fueron extraídas de las celdas y se procesaron en cabinas de seguridad biológica II A bajo condiciones de esterilidad. -Se realizaron varios lavados de las mismas con solución Balanceada PBS 1X con antibiótico y antimicótico. -Se procedió a realizar una desintegración mecánica parte del tejido se sembró y el resto del tejido se procedió a realizar una desintegración enzimática con tripsina 0,25 % La desintegración del tejido fue total en 20 minutos , la tripsina con las células se coloco en un tubo con SFB para la inactivación de la misma -Se centrifuga a 1500 rpm durante 15 minutos El pellet se resuspende con medio de cultivo con 10% de SFB -Se hace viabilidad de las células y se cuentan con azul trypan en cámara de Newbahuer -Se pudo observar una gran viabilidad celular con una concentración celular abundante -Se sembraron 3 frascos con células de cada estadio larvario con diferentes medios de cultivo (TNMFH ,Grace`s y Exprees Five Medium ) con 10 % de SFB,antibiotico (Pen/estrep/Genta ) y antimicótico ( anfotericina B) -Se pudo observar tanto en los cultivos de cèlulas dispersas como en los macerados de tejidos focos de desarrollo celular a partir de las 96 hs .Se pudieron observar crecimiento de cèlulas en focos y desarrollo de células en suspensión -Se observo crecimiento en todos los medios de cultivos observándose un mayor desarrollo en el medio TNFH Luego de 3 pasajes se observó un crecimiento celular muy lento se realizo RT-PCR a las células y se pudo comprobar que las mismas estaban infectadas con virus ( Virus de las alas deformadas y virus de las celdas reales negras)
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abejas
virus
cultivos
celulares
aislamiento