Investigadores

Resumen

Samartino, Luis Ernesto
Mercado, Elsa Cristina
Conde, Sandra Beatríz
Brihuega, Bibiana Felicitas

Dando continuidad a los trabajos iniciados en el periodo anterior,  ademas de brucelosis y E coli 0: 157 se informan las actividades de leptospirosis..

Escherichia coli  es productor de toxina Shiga (STEC) causa en el hombre el síndrome urémico hemolítico (SUH) que es la principal causa de falla renal aguda en niños menores de 5 años en Argentina. STEC  y se considera a los bovinos el principal reservorio y fuente de infección humana.  Diversos factores de virulencia adicionales, como la producción de intimina (eae) y la toxina enterohemolisina (ehxA) se encuentran presentes en los serotipos de STEC denominados enterohemorrágicos (EHEC).  En este período, se transformaron células E. coli XL-1 con las construcciones. Se purificó el vector pGem-T clonado y se liberó el inserto mediante enzimas de restricción.  Se purificó y cuantificó el inserto y se clonó en el vector de expresión pRSET A que permite la fusión de 6 moléculas de histidina en el extremo N terminal. Las construcciones se confirmaron por PCR.  Se realizó la inducción de las células E. coli BL-21 (DES) pLys.transformadas con la construcción del plásmido de expresión pRSET C280 Ã-Intimina. Se comenzó la purificación de la proteína por columna de afinidad.  Posteriormente,   se subclonó intimina gamma, beta y theta en plásmido de expresión y se obtuvieron transformantes de E. coli BL21.   En el tema leptospirosis se adaptó un protocolo de Inmunohistoquímica para detectar al agente etiológico en muestras de tejido fijadas en formaldehído al 10% e incluídas en parafina. 1-Se evaluó la técnica de  inmunohistoquímica (IHQ) en muestras de tejido renal de cobayos  inoculados experimentalmente con L. Pomona. Se observó inmunomarcación positiva en el borde apical de las células tubulares y en la luz tubular. 2-Se estudiaron las lesiones vasculares en tejido placentario ante una infección leptospirósica utilizando las técnicas especiales de PAS y Tricrómico de Masson modificado por Lillie. Se observaron cambios compatibles con fenómenos de hipersensibilidad tipo III.biopelículas .  En brucelosis,  el objetivo fue evaluar el FPA para el diagnóstico de la Brucelosis bovina a partir de muestras de sangre entera. Hasta el momento fueron analizados 4175 muestras de hembras bovinas por las siguientes pruebas serológicas: Antígeno Buferado en placa (BPA), Wright (SAT), 2-Mercaptoetanol (2-ME), Fijación de Complemento (FC) y FPA tanto en muestras de suero como de sangre entera con anticoagulante (EDTA). Basándose en FC como prueba de referencia,  se utilizó una curva ROC para establecer los cutoff del FPA en sangre que corresponden a la mayor especificidad y sensibilidad, sugiriendo un rango de hasta 85 mP para los negativos, de 86 a 95 para los sospechosos y mayor de 95 para los positivos. Además el coeficiente de correlación de Pearson fue de 0.9448 (p:0.00) entre FPA en suero y sangre indicando una alta correlación entre ambas. El FPA es una técnica sencilla, que al poder ser utilizada en sangre entera permitiría obtener resultados en forma inmediata,  en casos en donde se requiera. Seguiremos analizando muestras para ajustar el cutoff.Continuando los estudios de brucelosis en el ganado lechero,  se utilizaron 152 muestras de leche bovina, de tanques de establecimientos libres de brucelosis y 100 de infectados. Cada muestra posee mezclas de leche de 50 a 300 animales, se le realizó la prueba de anillo en leche (PAL) y ELISA indirecta. Además se intento al aislamiento en agar triptosa y medios selectivos. Se extrajo el ADN y amplificó mediante la técnica de PCR multiplex utilizando un sistema de cinco primers. Se confirmaron las muestras positivas utilizando PCR simple.Las bandas fueron observadas en geles de agarosa teñidos con bromuro de etidio. Se compararon los resultados de todos los ensayos realizados. Fue extraído ADN de cepas de referencia como controles y procesadas por PCR simple y multiplex.De las 252 muestras abalizadas, 207 fueron positivas a IELISA, 181 a PAL, 4 positivas a PCR multiplex (4 B. abortus biot 1 y 1 B. suis) y reconfirmadas por PCR simple.

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Palabras claves: 

Brucelosis

Leptospirosis

Tuberculosis

Diagnóstico